自噬流檢測

自噬是調節真核細鵬生長、和能量代謝的重要生物學機制。細胞自噬行使其生物學功能的前提是自噬流的話化。大量證據表明自噬流受損與多種慢性炎性疾病，特別是、神經退行性疾病及組織纖維化的發病密切相關，目前對于自噬液的檢別是自噬與其相關疾病研究領域的熱點。由于自噬流是一個曲多個步驟組成的動態過程。因此往需要精細的突驗才能準確判斷自啦流狀態。AnnexinV是Ca2+依賴的磷脂結合蛋白，對PS有很高的親和性，并且可以與暴露于細胞外的PS相結合。

透射電鏡自噬小體檢測

胰酶消化，收集作用后的細胞，離心，先將細胞塊固定在2.5%成二醛和0.1%的PBS溶液中保存在4C中過夜。

再用乙醇梯度脫水，接下來用環氧樹脂浸透并切成薄片。隨后超薄切片用銅網固定，后用重金屬醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛染色。通過TEM分析凋亡細胞內超微結構變化，拍照保存。

貼壁細胞:先倒出培養液，采用胰蛋白酶消化或者用細胞刮(會產生碎屑)刮下:帶培養液進行離心，100-1500/mim 5 10min。離心完畢倒出培養液。管底的細胞團不要打散， 沿管壁倒入適量(一般為材料體積的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液，固定約1h-2h. 也可在4C冰箱過夜。大鼠gu髓間充質gan細胞的分離操作方法(1)取SD大鼠(2周齡)，頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺內，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。

大鼠主動脈內皮細胞的分離培養

方法：分離大鼠主動脈,直接貼壁于培養皿中,熒光倒置顯微鏡觀察細胞形態,免yi組化Ⅷ因子相關抗原染色鑒定細胞.結果:約24小時組織塊邊緣有游離的 新生細胞長出,7天即融合成片.消化傳代后細胞呈短梭形或三角形,單層生長,鋪路石狀,Ⅷ因子表達陽性,呈指數增殖.凍存后復蘇細胞活性均超過90%.結 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內皮細胞體外培養方法,凍存細胞存活率高,為體外研究提供了穩定的模型.

選擇實驗外包公司需要注意哪些事項？

技術支持

盡量有專門的技術負責對接項目，或者有技術服務群。隨時溝通項目問題，定期匯報實驗進展。這樣能把控實驗進度，結果數據有疑問也可以交流，不要實驗做完就沒人管了。

實驗數據

明確提供實驗原始數據、原始圖片，并有保密協議不外傳數據和客戶的信息。確保實驗結果的完整性、唯獨性、真實性。這也是找實驗外包很關心的原則。另外結果盡量有實驗報告形式，包含所用材料、實驗步驟和結果統計分析，方便寫文章時直接使用。另外實驗都是有不確定性的，如果外包公司能保證一定能做出預期的結果，那多半是不靠譜的。做實驗不怕出問題，的外包公司會負責到底，有問題反饋再處理就好。2019年公司成為江蘇省生物技術協會第七屆理事會的特邀理事，成立了“李冬冬創新工作室”，并獲得了南京市“工人先鋒號”的榮譽稱號。