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核酸檢測PCR實驗室建設要點:通常PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求,需根據實驗內容確定實驗室潔凈度。當PCR實驗樣品需要保護時,實驗室應設潔凈空調系統。對于2019-nCoV核酸檢測實驗室,建議設置10萬級凈化。
氣流組織宜采用上送下排,送風口和排風口布置應使室內氣流停滯的空間降低到較小程度。在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點的上方附件不得設送風口過濾器排風口應設在室內被污染風險高的區域,單向布置,不得有障礙;不能以回(排)風夾墻代替排風直管,排風過濾裝置與排風總管的連接必須全部是實體風管。
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PCR實驗室各區功能及主要設備:試劑準備區:主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區域。
樣品制備區:主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。 本區主要設備有冰箱,生物安全柜,離心機,加樣器,振蕩器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染,壓力一般設計為+10Pa。
擴增區:主要進行DNA擴增項目。已制備的DNA模板(來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有:冰箱,加樣器,離心機,擴增儀等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶從本區漏出,壓力一般設計為-25Pa。
擴增產物分析區:主要進行擴增產物的測定。本區主要設備有加樣器,、和水浴箱等。本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域,壓力一般設計為-25Pa。
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PCR實驗室各區域儀器設備配備通常如下:
(1)標準的PCR實驗室試劑準備區: 儀器設備主要應有加樣器、冰箱、天平、低速離心機、混勻器、可移動紫外燈等。可使用超凈工作臺作為試劑配制操作臺面。
(2)標準的PCR實驗室標本制備區儀器設備主要應有生物安全柜(盡量為B2, 可避免提取核酸在柜內反復循環,造成標本間交叉“污染”,出現假陽性結果。此外還應配備加樣器、臺式高速離心機(冷凍及常溫)、臺式低速離心機、恒溫設備(水浴和/或干浴儀)、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。
(3)標準的PCR實驗室擴增區主要儀器就是核酸擴增熱循環儀(PCR儀,實時熒光或普通的)。熱循環儀的電源應,并配備一個穩壓電源或UPS,以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響。此外,根據工作需要,還可配備加樣器、超凈臺等。
(4)標準的PCR實驗室產物分析區:本區所使用的儀器設備可能有加樣器、電泳儀(槽)、電轉印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、和等。在理想情況下,PCR實驗室試劑準備、標本制備、擴增三個區域可設置緩沖間。在緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向室內
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