菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜

（1） 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。

（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。

（3） 吸干濾膜，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。

（4） 吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。

（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時，固定DNA。

（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。

DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比，DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強(qiáng)度較弱，因此在雜交后的洗滌中不應(yīng)使用甲醛。

探針特異性至關(guān)重要。如果已知細(xì)胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列，則可據(jù)此設(shè)計高度的互補(bǔ)探針。如果超過 5% 的堿基對不互補(bǔ)，那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著，探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去，可能無法正確檢測。

原位雜交（In situ hybridazation）

固定

收集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水中培養(yǎng)，到達(dá)所需要的發(fā)育時期時，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小時后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后換成，在-20C 保存，待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培養(yǎng)，可阻斷色素的形成)

植物原位雜交在遺傳育種方面的應(yīng)用主要包括：

檢測物種或品種特異性：通過植物原位雜交技術(shù)可以檢測出不同物種或品種之間基因表達(dá)的差異，從而為物種或品種特異性研究提供依據(jù)。

遺傳育種：通過植物原位雜交技術(shù)可以檢測到不同品種之間基因表達(dá)的差異，從而為遺傳育種提供重要的參考信息。例如，通過將特定的外源基因?qū)氲街参锛?xì)胞中，然后利用原位雜交技術(shù)檢測該基因在植物細(xì)胞中的位置和表達(dá)情況，為遺傳育種提供重要的參考信息。