8分鐘前 植物RNA原位雜交技術服務服務周到「科銳諾」[科銳諾44070b2]內容：近年來基因檢測在結1核病診斷中應用越來越廣泛，但主要應用于痰液等新鮮標本，在石蠟包埋組織標本中應用非常少。我們建立了利用熒光定量PCR及膜探針雜交法鑒別診斷結1核病與非結1核分枝桿1菌病的分子病理檢測方法；建立了利用高分辨溶解曲線法檢測1線抗結1核核1心藥1物利福平及異煙肼的耐藥情況的分子病理檢測方法。我們在首都臨床醫學發展專項的資助下進行大樣本臨床驗證。這些方法也將陸續轉化為我院分子病理診斷項目。

原位雜交雜交液注意事項：

（1）雜交液內除含一定濃度的標記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。

（2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標本之間的靜電結合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態結構的破壞以及標本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達到提高雜交率的目的（尤其對雙鏈核酸探針）。

在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與組織結構成分之間的非特異性結合，以減低背景。

滴加FITC-TSA：滴加FITC-TSA試劑，避光室溫反應5min。后TBST洗3次×10min，PBS洗1次×5min。

DAPI復染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片1劑封片。

鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發波長330-380nm，發射波長420nm,發藍光；FAM(488)綠光激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm，發綠光；CY3紅光激發波長510-560，發射波長590nm，發紅光。）