全自動(dòng)核酸提取儀——磁珠法有什么特別之處?
磁珠法核酸自動(dòng)提取儀是以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低pH值下吸附核酸,在低鹽高pH值下與核酸分離的特性,再通過移動(dòng)磁珠或轉(zhuǎn)移液體來實(shí)現(xiàn)核酸的整個(gè)提取純化過程。
根據(jù)移液特點(diǎn)的不同,磁珠法核酸自動(dòng)提取儀可分為抽吸式(也叫移液式)和磁棒式兩種類型。前者因提取時(shí)間較長,且機(jī)械臂移液的設(shè)計(jì)造成設(shè)備體積較大、成本較高等因素,無法在商業(yè)上迅速推廣。目前市場上使用較多的大部分是基于磁棒式的磁珠法核酸提取儀,也是本文介紹的重點(diǎn)。
全自動(dòng)核酸提取儀的特點(diǎn)
核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來自動(dòng)完成樣本核酸提取工作的儀器。廣泛應(yīng)用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。
1. 能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、高通量操作。
2. 操作簡單、快速。
3. 安全環(huán)保。
4. 高純度,高得率。
5. 無污染,且結(jié)果穩(wěn)定。
6. 成本低廉,便于廣泛應(yīng)用。
7. 可以同時(shí)處理不同類型的樣本。
全自動(dòng)核酸提取儀——類型介紹
磁珠法自動(dòng)核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法
先說抽吸法:顧名思義,抽吸法就是通過自動(dòng)移液裝置來進(jìn)行,通過自動(dòng)移液裝置來加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附,抽走漂洗液,加入洗脫緩沖液。從步驟上好像沒什么問題,但是抽吸法的問題在于,為了在去除廢液的時(shí)候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉,這樣每一次抽廢液的時(shí)候總有一小部分不能完全的抽走,特別是磁鐵在底部的裝置,因?yàn)榇胖楸淮盆F吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,這樣漂洗液就不能完全去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會(huì)影響后面的洗脫效率和PCR成功率;磁鐵在側(cè)面的裝置殘留的液體會(huì)少些,但是洗脫的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,除非等上半小時(shí)以上,所以有些96自動(dòng)核酸提取工作站,提取一輪的時(shí)間需要150分鐘,32磁棒法的同樣的時(shí)間可以提5輪了。
再說磁棒法核酸提取儀:通量通常有8、16、32、96通道,相對(duì)于抽吸法,磁棒法的優(yōu)點(diǎn)是每一步的液體不殘留,因?yàn)榇虐糁粠ё叽胖?,轉(zhuǎn)移到下一個(gè)步驟相應(yīng)的反應(yīng)孔中,另外選擇磁棒法的提取儀器盡量要功能更齊全的,比如可以加熱,每個(gè)加熱槽獨(dú)立溫控,這樣可以設(shè)置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,另外很重要的一點(diǎn)是,帶動(dòng)磁棒的電機(jī)要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗。磁棒法的通量選擇盡量是32通道,96通道的看似通量更高,但是有個(gè)很現(xiàn)實(shí)的問題,96個(gè)磁力棒在從一個(gè)板轉(zhuǎn)移至另外一個(gè)板的時(shí)候,磁力棒上面的液體中途滴下來怎么辦,它會(huì)滴到別的孔中造成污染,而32通道的磁力棒運(yùn)行軌跡不經(jīng)過其他樣本的上空,這樣不會(huì)交叉污染。