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拉曼光譜儀在生物方面上的應用
拉曼光譜是研究生物大分子的有力手段,由于水的拉曼光譜很弱、譜圖又很簡單,故拉曼光譜可以在接近自然狀態、活性狀態下來研究生物大分子的結構及其變化。拉曼光譜在蛋白質二級結構的研究、DNA和致癌物分子間的作用、視紫紅質在光循環中的結構變化、操作中的鈣化沉積和紅細胞膜的等研究中的應用均有文獻報道。利用FT-Raman消除生物大分子熒光干擾等,有許多成功的示例。
用拉曼光譜測量物質成分的基本原理
當一束‘單色光’照射到樣品上后,分子可以使入射光發生散射。散射有兩種類型:
1)大部分光遇到原子后發生‘彈性散射’,光的方向改變了,而頻率沒有改變,這種散射稱為瑞利散射。
2)小部分光發生了‘化學鍵散射’,散射光的方向改變了,頻率也改變了,這種散射稱為拉曼散射。‘拉曼散射中存在頻率減少的部分’稱為斯托克斯散射,也存在‘頻率增加的’部分,這散射稱為反斯托克斯散射;斯托克斯散射通常要比反斯托克斯散射強得多,拉曼光譜儀通常測定的是斯托克斯散射,也簡稱為測定拉曼散射。
值得強調的是,拉曼散射可以測量出化學鍵的‘頻率偏移量’和‘能量改變量’這兩個特征量,不同化學鍵有不同的特征量;由此可以計算確定出每個‘化學鍵的共振頻率’和‘共振能量’;分子可能有若干化學鍵,每個化學鍵都能被測出,于是不同分子就會有不同的‘拉曼光譜’,就像不同生物有不同的‘基因譜’一樣,‘拉曼光譜’是識別物質的重要手段。
便攜式拉曼光譜儀主要由以下部分組成
1.激光器:通常采用低功率的激光器,產生出波長為785nm、532nm或1064nm等不同的激光束照射到樣品表面。
2.分光鏡組件:分光鏡組件將激光束引導到樣品表面,并收集散射的拉曼光譜信號。
3.光學濾鏡:通過光學濾鏡來排除來自背景的光信號,并減少混雜的信號干擾。
4.接收裝置:接收裝置可以使用CCD或CMOS等光電探測器來收集光譜信號,并通過它們來生成拉曼光譜圖。
5.軟件系統:還配備了數據處理和管理軟件,以便對測量數據進行分析和處理。