二、使用說明

1、裝載探針

對于刺激時間較短（通常為2小時以內）的細胞，先裝載探針，后用活性氧陽性對照及自己感興趣的刺激細胞。對于細胞刺激

時間較長（通常為6小時以上）的細胞，先用活性氧陽性對照及自己感興趣的刺激細胞，后裝載探針。

原位裝載探針：本方法僅適用于貼壁培養細胞。按照1：1000用無培養液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。腺相關病毒具有gan染溫和,免yi原性小,長效穩定表達的特點,主要應用于動物體內注射。去除細胞培養液，加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜，通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA的體積為1毫升。37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。用無細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。

通常活性氧陽性對照在刺激細胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

收集細胞后裝載探針：按照1：1000用無培養液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。細胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中，細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。-個染色體區域可以有很多SNP位點,但是我們一-旦掌握了這個區域的單體型,就可以只使用少數幾個標簽SNPs(tagSNP)來進行基因分型,獲取大部分的遺傳多態模式。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。用無細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照及自己感興趣的刺激細胞，或把細胞等分成若干份后刺激細胞。通常活性氧陽性對照在刺激細胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

2.、檢測

對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測。

對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。

單細胞RNA測序

單細胞RNA測序也稱scRNA-Seq。通常而言，一般的組織細胞RNA-seq實驗會產生1000萬個讀數，如果一個基因的頻率超過50RPKM，即每百萬讀數中每千個堿基中超過50個，這一基因即被認為有表達。二、大腸菌群檢驗方法:由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，即:需氧及兼性厭氧、在37°C能分解乳糖產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞。泊松分布下，1kb長的基因有超過500個讀數和4%的小變異系數，即CV值；哺乳動物細胞通產含有200,000個mRNA，因此至少要用50個單細胞一起才能到達小CV值；考慮到逆轉錄的效率和環境干擾等因素，為得到準確的表達和細胞種類的識別，需要使用的細胞數量實際要更多。