酶標(biāo)儀的分類

光是電磁波，波長(zhǎng)100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂盏拇蟛糠譃榧t橙光和藍(lán)紫光，但對(duì)綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。

隨著檢測(cè)方式的發(fā)展，擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀，可檢測(cè)吸光度（Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光（TRF)、熒光偏振（FP)、和化學(xué)發(fā)光（Lum)。

酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長(zhǎng)范圍內(nèi)的任意波長(zhǎng)，而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。

酶標(biāo)儀的采購建議

測(cè)定的吸光度范圍通常，酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在0～2.5之間即可以滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0～2.5之間，但現(xiàn)在基本上都做了拓寬，可達(dá)到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。

光學(xué)系統(tǒng)，酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測(cè)，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測(cè)定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測(cè)定的精密度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

酶標(biāo)儀的檢驗(yàn)

1、重復(fù)性：在一定條件下所獲得的獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果之間的一致性程度即可重復(fù)性，可用CV值來表示。在某一特定的濾光片下測(cè)定某一塊酶標(biāo)板20次，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法求出所有測(cè)量值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。公式如下：

所有測(cè)量值的標(biāo)準(zhǔn)差

CV%=————————————×所有測(cè)量值的均值

2、準(zhǔn)確性：待測(cè)物的測(cè)定值與一可接受的參考值之間的差異。此項(xiàng)指標(biāo)需用雷勃公司標(biāo)準(zhǔn)板（PVT）來測(cè)。

測(cè)量值-參考值

準(zhǔn)確性=——————————×參考值

3、光路檢測(cè)：將一塊酶標(biāo)板正放測(cè)量一次，再將酶標(biāo)板反放測(cè)量一次，查看同一孔吸光值是否相同，從而查看其所有光路8通道是否均一。

⑴查看光路上的透鏡是否清潔。

⑵燈泡好否及亮度是否正常。

⑶濾光片是否清潔。

4、載軌運(yùn)動(dòng)：開機(jī)后酶標(biāo)儀能否自檢，自檢結(jié)束后撳“開始”，查看載軌運(yùn)動(dòng)是否正常及有無噪聲。

5、按鍵膜的好壞：開機(jī)后試用所有按鍵膜，查看其功能是否完好。

如何使用MK3酶標(biāo)儀測(cè)吸光度

1.將實(shí)驗(yàn)待測(cè)樣品分裝到多孔板上。96孔板推薦每孔100ul -200ul體積，384孔板推薦每孔50ul-80ul體積為宜。如因?qū)嶒?yàn)需要，同一塊多孔板上不同孔的樣品體積無法保持一致，需選用帶光程矯正功能的酶標(biāo)儀，將光程矯正到統(tǒng)一的數(shù)值，例如Molecular Devices品牌的酶標(biāo)儀。

2.打開儀器 的微孔板艙門，將多孔板放置入儀器內(nèi)并關(guān)上艙門。

3.打開儀器軟件，在實(shí)驗(yàn)參數(shù)設(shè)置界面選擇ABS功能。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康目蛇x擇不同的檢測(cè)模式（Reader Type），包括終點(diǎn)法（Endpoint）、動(dòng)力學(xué)法(Kinetic)、孔域掃描(Well Scan)和光譜掃描(Spectrum)。

4.設(shè)置波長(zhǎng)，版型，然后讀板，得到數(shù)據(jù)。