yao物對(duì)細(xì)胞的IC50檢測(cè)

IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測(cè)量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一yao物或者物質(zhì)(yi制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質(zhì)，比如酶，細(xì)胞受體或是微生物)的半量。自噬形成時(shí)，GFP-LC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個(gè)明亮的綠色熒光斑點(diǎn)，一個(gè)斑點(diǎn)相當(dāng)于一個(gè)自噬體，可以通過(guò)計(jì)數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)自噬活性的高低。在凋亡方面，可以理解為一定濃度的某種藥wu誘導(dǎo)腫liu細(xì)胞凋亡50%，該濃度稱(chēng)為50%抑制濃度，即凋亡細(xì)胞與全部細(xì)胞數(shù)之比等于50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度，IC50值可以用來(lái)衡量yao物誘導(dǎo)凋亡的能力，即誘導(dǎo)能力越強(qiáng)，該數(shù)值越低，當(dāng)然也可以反向說(shuō)明某種細(xì)胞對(duì)yao物的耐受程度。

Q:中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？

A:基于多年的實(shí)驗(yàn)研究，用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛以及其它中可能會(huì)存在以下種類(lèi)的沉淀物：

（1）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到 1-2mm，可以用肉眼觀察到。電鏡形態(tài)學(xué)觀察法是一種比較經(jīng)典、可靠的方法，被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)槎际窃诘蜏叵逻M(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過(guò)程中仍然處于溶解狀態(tài)，當(dāng)經(jīng)過(guò)的過(guò)濾分裝后，就會(huì)在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。

（2）磷酸鈣，它也是常見(jiàn)的一種沉淀物，通常會(huì)使出現(xiàn)渾濁，并且在 37℃ 培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)， 這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

（3）膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是中出現(xiàn)沉淀物的常見(jiàn)原因。

Q:如何避免中沉淀物的出現(xiàn)？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過(guò)程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養(yǎng)；

（3）反復(fù)凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長(zhǎng)期儲(chǔ)存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將分裝到無(wú)菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過(guò)濾。

注意：不要以過(guò)濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。