原位雜交第二天

1.

1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復(fù)使用十次左右）。

2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。

3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。

4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。

2.

1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。

2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。

結(jié)1核病是嚴(yán)重威脅人類健康的傳1染性疾病，每年約有200萬人死于該病，其死1亡率在傳1染性疾病中僅低于艾1滋病，隨著醫(yī)1療診斷技術(shù)的迅猛發(fā)展，結(jié)1核病病理診斷經(jīng)歷了單一形態(tài)學(xué)和聯(lián)合特殊染色，到如今利用分子病理基因檢測技術(shù)進(jìn)行準(zhǔn)確診斷的三個階段。

我科早在全1國建立了系統(tǒng)性結(jié)1核病分子病理診斷技術(shù)的平臺，率1先將分子病理診斷技術(shù)在結(jié)1核病中應(yīng)用并推廣，解決了傳統(tǒng)病理對菌陰肺結(jié)1核及肺外結(jié)1核病的診斷率低、結(jié)1核病與非結(jié)1核分枝桿1菌病無法鑒別以及耐藥結(jié)1核病無法診斷等難題。同時，我科作為中華醫(yī)學(xué)會結(jié)1核病學(xué)分會金1牌病理培訓(xùn)基地，負(fù)責(zé)組織制定了結(jié)1核病病理診斷規(guī)范、培訓(xùn)了大量的專1業(yè)技術(shù)人員，為形成結(jié)1核病病理學(xué)綜合診治新模式做出了卓1越貢獻(xiàn)!

1、組織取材：組織取材應(yīng)盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養(yǎng)細(xì)胞在30 min 內(nèi)固定。

2、細(xì)胞組織固定目的與注意事項：

（1）保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)；

（2）大限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平；

（3）使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。

常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑不同，多聚甲醛不會與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接，因而不會影響探針穿透入細(xì)胞或組織。