原位雜交第三天

1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時(shí)以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。

2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。

3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動(dòng)，室溫下顯色。

4）每隔一小時(shí)觀察胚胎是否開(kāi)始顯色

5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

原位雜交技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括陽(yáng)性信號(hào)和陰性信號(hào)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽(yáng)性信號(hào)是指探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物，在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標(biāo)記下呈現(xiàn)出明顯的信號(hào)。陰性信號(hào)是指探針未與目標(biāo)核酸序列結(jié)合，不呈現(xiàn)任何信號(hào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)以及實(shí)驗(yàn)條件等因素綜合進(jìn)行。

原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用：

生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)：在生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如，通過(guò)標(biāo)記特定基因的探針，可以檢測(cè)環(huán)境中微生物種群的分布和變化，進(jìn)而研究其對(duì)環(huán)境的影響和作用。

進(jìn)化生物學(xué)：在進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進(jìn)化關(guān)系。例如，通過(guò)比較不同物種之間基因序列的差異，可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。

生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子：

基因表達(dá)和調(diào)控研究：原位雜交技術(shù)可以用于研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。例如，可以標(biāo)記特定基因的探針，檢測(cè)該基因在不同環(huán)境、不同生長(zhǎng)條件下的表達(dá)情況，進(jìn)而研究其表達(dá)調(diào)控機(jī)制。

細(xì)胞分化與發(fā)育研究：在細(xì)胞分化與發(fā)育研究中，原位雜交技術(shù)常被用于檢測(cè)和定位特定基因的表達(dá)情況，進(jìn)而了解細(xì)胞分化的過(guò)程和機(jī)制。例如，可以標(biāo)記與細(xì)胞分化相關(guān)的基因探針，檢測(cè)該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達(dá)情況。